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在ELISA試劑盒操作中,我們都認為elisa實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗,在實驗結(jié)束時,我們是否能獲得有意義的信息,
這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比,背景噪音會影響您對結(jié)果的判斷!免疫檢測法的精確性表現(xiàn)為單次實驗孔間(批內(nèi))的重復(fù)性和多次實驗之間(批間)的重復(fù)性。CV值高則表明精確度低,通常由以下兩個原因造成:移液技術(shù)和洗滌技術(shù)。
一、移液技術(shù)
1. 移液時,槍頭應(yīng)對準孔,避免接觸孔壁及底部。
2. 移液后輕輕晃動混勻試劑。
3. 如果您的樣品具有黏性,請預(yù)先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時等待片刻使體積平衡后再取出。
4. 移液不充分或移液體積不均,說明移液器需要校正。必要時請檢查移液器并重新校正。
5. 加樣時,不同的試劑標準品和樣本間都要確保更換槍頭,避免交叉污染。
6. 確保使用合適的槍頭。不合適的槍頭無法正確量取吸液和加樣的體積。
二、洗滌技術(shù)
1. 如果使用自動洗板機或多通道移液器,請確保進出口能正常運作。
2. 一次洗滌后,翻轉(zhuǎn)酶標板倒出多余的洗滌液,并在吸水紙上拍干液體。洗板太快或太慢都會降低精確度。不能讓孔內(nèi)液體自然風干,需立即進行下一步操作。
3. 按照說明書,添加足量的洗滌液至孔內(nèi),并保證洗滌*。
4. 由于洗滌液不是通用的,當試劑盒內(nèi)的洗滌液用完時,請不要使用其他試劑盒中的洗滌液。如有需要,可聯(lián)系技術(shù)支持尋求幫助。
5. 不要減少洗滌時的浸泡時間或跳過浸泡的步驟。
6. 按照說明書上的洗滌次數(shù)清洗,隨意改變洗滌的次數(shù)會影響實驗的精確性。
三、貯液瓶
為避免污染,不同的試劑使用不同的貯液瓶。一些試劑或樣本很容易被污染(比如唾液、氧化劑等),請參考說明書操作。必要時候采取一些預(yù)防措施保護溶液。
四、封板覆膜
使用過的封板覆膜可能含有上一步實驗殘留的試劑,如果重復(fù)使用會造成孔板污染,從而導(dǎo)致精確性低。建議每一次孵育使用新的封板覆膜。
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