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    ELISA試劑盒抗原抗體反應(yīng)

    發(fā)布時(shí)間: 2023-06-20  點(diǎn)擊次數(shù): 1255次

    1 可逆性

    Ag·Ab 的解離程度與K 值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合,兩者結(jié)合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性,因此可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗體。在抗血清中,特異性的IgG 抗體僅占總IgG 中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體,稱為親和層析純抗體,應(yīng)用于免疫測(cè)定中可得到更好的效果。

    2 合適比例

    在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復(fù)合物(沉淀)的量見(jiàn)圖1-4。曲線的高峰部分是抗原抗體比例合適的范圍,稱為等價(jià)帶(zone of equivalence )。在等價(jià)帶前后分別為抗體過(guò)剩帶和抗原過(guò)剩帶。

    如果抗原或抗體極度過(guò)剩,則無(wú)沉淀物形成,在免疫測(cè)定中稱為帶現(xiàn)象(zone phenomenon )??贵w過(guò)量稱為前帶(prezone),抗原地過(guò)量稱為后帶(postzone)。在用免疫學(xué)方法測(cè)定抗原時(shí),應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量,否則測(cè)得的量會(huì)小于實(shí)際含量,甚至出現(xiàn)假陰性。

    3 特異性

    抗原抗體的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系,所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。例如乙肝病毒中的表面抗原( HBsAg )、e 抗原(HBeAg)和核心抗體(HBcAg),隨來(lái)源于同一病毒,但僅與其相應(yīng)的抗體結(jié)合,而不與另外兩種抗體反應(yīng)。抗原抗體反應(yīng)的這種特異性使免疫測(cè)定能在一非常復(fù)雜的蛋白質(zhì)化合物(例如血清)中測(cè)定某一特定的物質(zhì),而不需先分離待檢物。

    但是這種特異性也不是絕對(duì)的。假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構(gòu),在抗原抗體反應(yīng)中可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。例如:絨毛膜促性腺激素( hCG)和黃體生成激素(LH)均由α和β兩個(gè)亞單位組成,其結(jié)構(gòu)的不同處在β亞單位,而兩者的α亞單位是同類(lèi)的。用hCG 免疫動(dòng)物所得的抗血清中含有抗α-hCG 和抗β-hCG 兩種抗體,抗α-hCG 抗體將與LH 中的α酶位發(fā)生交叉反應(yīng)。在臨床檢驗(yàn)中,如用抗hCG 抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG,只能用于hCG 濃度較高的試驗(yàn),否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH 將與之發(fā)生交叉反應(yīng)。因此在作為早孕診斷(敏感度應(yīng)達(dá)到50mIu/mlhCG )的實(shí)際中必須應(yīng)用只對(duì)hCG 特異的抗β-hCG,以避免與其它激素的交叉反應(yīng)的發(fā)生。

    4 敏感性

    在測(cè)定血清中某一物質(zhì)的含量時(shí),化學(xué)比色法的敏感度為 mg/ml 水平,酶反應(yīng)測(cè)定法的敏感度約為5~10μg/ml,免疫測(cè)定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。標(biāo)記的免疫測(cè)定的敏感度可提高數(shù)千倍,達(dá)ng/ml 水平。例如,用放射免疫測(cè)定法或酶免疫測(cè)定法測(cè)定HBsAg,其敏感度可達(dá)0.1ng /ml。

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